內(nèi)蒙環(huán)境監(jiān)測機(jī)構(gòu)分析到紫外線消毒效果驗(yàn)證的目的是驗(yàn)證紫外線對物體表面的消毒效果，并將其作為傳、潔凈室等場所消毒滅菌的輔助手段。

　　紫外線消毒效果驗(yàn)證：準(zhǔn)備工作。

　　1.儀器設(shè)備：

　　醫(yī)用超凈臺、電熱恒溫培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱。

　　2.器材：

　　滅菌刻度吸管(1ml，10m1)、滅菌試管、滅菌平皿、酒精燈、載體(1.0×1.0cm玻片)

　　3.材料及試劑：

　　純化水、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、金黃色葡萄球菌、稀釋劑(0.9%氯化鈉溶液)

　　紫外線消毒效果驗(yàn)證：驗(yàn)證工作。

　　1.試驗(yàn)環(huán)境。

　　試驗(yàn)在潔凈度1萬級以下局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)進(jìn)行，全過程嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作。單向流空氣區(qū)。工作臺面和環(huán)境定期按照《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮顆粒試驗(yàn)方法》現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行清潔度驗(yàn)證。浮游菌和沉降菌。

　　每次操作開始前，打開紫外線照射1小時(shí)。

　　2.培養(yǎng)基的制備。

　　營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：

　　根據(jù)需要，將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基粉放入合適的容器中，按配方比例加入純化水，水浴加熱溶解，將pH值調(diào)整至7.1±0.2，放入合適的容器中，高壓滅菌器滅菌121℃×15分鐘。

　　營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基：

　　稱營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基20克，加入1000毫升純化水，加熱溶解，加熱至沸騰，冷卻至常溫，分裝在合適的容器中，高壓滅菌器滅菌121℃×15分鐘。

　　3.確定細(xì)菌及其孢子和真菌的殺滅作用。

　　制備菌液，將滅菌載體平放在滅菌平皿中進(jìn)行驗(yàn)證，通過陽性對比計(jì)算結(jié)果。

　　合格標(biāo)準(zhǔn)：空白對照應(yīng)無菌生長；指示菌殺滅率≥99.9%判定為消毒合格。

　　紫外線消毒效果驗(yàn)證：驗(yàn)證方法。

　　1.測量輻照強(qiáng)度。

　　1)打開紫外線5min后，用中心波長為253.7nm的紫外線強(qiáng)度測量儀在燈管下垂直1m的中心測量輻照值(uW/cm2)。

　　2)測量時(shí)，電壓應(yīng)穩(wěn)定在220V。

　　3)普通或低臭氧直管紫外線燈(30W)，在燈管下垂直1m的中心，新燈管。

　　輻照值應(yīng)≥90uW/cm2。使用中燈管的輻照值應(yīng)≥70uW/cm2，低于此值者應(yīng)更換。

　　2.照射劑量。

　　表面消毒接受的照射劑量應(yīng)滿足殺滅目標(biāo)微生物的要求。對于大腸桿菌，照射劑量應(yīng)達(dá)到7.5×103uW·s/cm2，對于金黃色葡萄球、白色念珠菌和枯草芽孢桿菌，應(yīng)達(dá)到2.53×104uW·s/cm2。

　　照射劑量計(jì)算:照射劑量(uWs/cm2)=紫外燈管強(qiáng)度(uW/cm2)×?xí)r間(s)

　　3.確定細(xì)菌及其孢子和真菌的殺滅作用。

　　制備菌液:金黃色葡萄球菌新鮮培養(yǎng)物、大腸桿菌新鮮培養(yǎng)物、枯草芽孢桿菌新鮮培養(yǎng)物。

　　新鮮的白色念珠菌培養(yǎng)物。

　　殺滅效果測定：

　　1)將滅菌載體平放在滅菌容器中，每個(gè)載體滴注定量細(xì)菌懸浮液，均勻涂抹，放入37℃培養(yǎng)箱干燥。打開紫外線5分鐘后，將16個(gè)染色玻片平放在滅菌容器中，水平放在適當(dāng)?shù)木嚯x照射中，在4個(gè)不同的間隔時(shí)間(15分鐘.30分鐘.45分鐘.60分鐘)取出4個(gè)染色玻片，分別放入4個(gè)5分鐘洗脫液試管中，振動(dòng)80次。

　　2)適當(dāng)稀釋后，取1ml洗脫液，倒入平板，每個(gè)染色玻片接種兩個(gè)，細(xì)菌30~35℃培養(yǎng)48小時(shí)，真菌23~28℃培養(yǎng)72小時(shí)。

　　陽性對照，除不進(jìn)行照射處理外，取4個(gè)染色玻片，分別放入4個(gè)5ml洗脫液試管中，振動(dòng)80次。其余的按1)操作。

　　最后，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)(指示菌殺滅率≥99.9%判定為消毒合格)，記錄驗(yàn)證結(jié)果。

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