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內(nèi)蒙環(huán)境監(jiān)測機(jī)構(gòu)分析到紫外線消毒效果驗(yàn)證的目的是驗(yàn)證紫外線對物體表面的消毒效果,并將其作為傳、潔凈室等場所消毒滅菌的輔助手段。
紫外線消毒效果驗(yàn)證:準(zhǔn)備工作。
1.儀器設(shè)備:
醫(yī)用超凈臺、電熱恒溫培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱。
2.器材:
滅菌刻度吸管(1ml,10m1)、滅菌試管、滅菌平皿、酒精燈、載體(1.0×1.0cm玻片)
3.材料及試劑:
純化水、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、金黃色葡萄球菌、稀釋劑(0.9%氯化鈉溶液)
紫外線消毒效果驗(yàn)證:驗(yàn)證工作。
1.試驗(yàn)環(huán)境。
試驗(yàn)在潔凈度1萬級以下局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)進(jìn)行,全過程嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作。單向流空氣區(qū)。工作臺面和環(huán)境定期按照《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮顆粒試驗(yàn)方法》現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行清潔度驗(yàn)證。浮游菌和沉降菌。
每次操作開始前,打開紫外線照射1小時(shí)。
2.培養(yǎng)基的制備。
營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基:
根據(jù)需要,將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基粉放入合適的容器中,按配方比例加入純化水,水浴加熱溶解,將pH值調(diào)整至7.1±0.2,放入合適的容器中,高壓滅菌器滅菌121℃×15分鐘。
營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基:
稱營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基20克,加入1000毫升純化水,加熱溶解,加熱至沸騰,冷卻至常溫,分裝在合適的容器中,高壓滅菌器滅菌121℃×15分鐘。
3.確定細(xì)菌及其孢子和真菌的殺滅作用。
制備菌液,將滅菌載體平放在滅菌平皿中進(jìn)行驗(yàn)證,通過陽性對比計(jì)算結(jié)果。
合格標(biāo)準(zhǔn):空白對照應(yīng)無菌生長;指示菌殺滅率≥99.9%判定為消毒合格。
紫外線消毒效果驗(yàn)證:驗(yàn)證方法。
1.測量輻照強(qiáng)度。
1)打開紫外線5min后,用中心波長為253.7nm的紫外線強(qiáng)度測量儀在燈管下垂直1m的中心測量輻照值(uW/cm2)。
2)測量時(shí),電壓應(yīng)穩(wěn)定在220V。
3)普通或低臭氧直管紫外線燈(30W),在燈管下垂直1m的中心,新燈管。
輻照值應(yīng)≥90uW/cm2。使用中燈管的輻照值應(yīng)≥70uW/cm2,低于此值者應(yīng)更換。
2.照射劑量。
表面消毒接受的照射劑量應(yīng)滿足殺滅目標(biāo)微生物的要求。對于大腸桿菌,照射劑量應(yīng)達(dá)到7.5×103uW·s/cm2,對于金黃色葡萄球、白色念珠菌和枯草芽孢桿菌,應(yīng)達(dá)到2.53×104uW·s/cm2。
照射劑量計(jì)算:照射劑量(uWs/cm2)=紫外燈管強(qiáng)度(uW/cm2)×?xí)r間(s)
3.確定細(xì)菌及其孢子和真菌的殺滅作用。
制備菌液:金黃色葡萄球菌新鮮培養(yǎng)物、大腸桿菌新鮮培養(yǎng)物、枯草芽孢桿菌新鮮培養(yǎng)物。
新鮮的白色念珠菌培養(yǎng)物。
殺滅效果測定:
1)將滅菌載體平放在滅菌容器中,每個(gè)載體滴注定量細(xì)菌懸浮液,均勻涂抹,放入37℃培養(yǎng)箱干燥。打開紫外線5分鐘后,將16個(gè)染色玻片平放在滅菌容器中,水平放在適當(dāng)?shù)木嚯x照射中,在4個(gè)不同的間隔時(shí)間(15分鐘.30分鐘.45分鐘.60分鐘)取出4個(gè)染色玻片,分別放入4個(gè)5分鐘洗脫液試管中,振動(dòng)80次。
2)適當(dāng)稀釋后,取1ml洗脫液,倒入平板,每個(gè)染色玻片接種兩個(gè),細(xì)菌30~35℃培養(yǎng)48小時(shí),真菌23~28℃培養(yǎng)72小時(shí)。
陽性對照,除不進(jìn)行照射處理外,取4個(gè)染色玻片,分別放入4個(gè)5ml洗脫液試管中,振動(dòng)80次。其余的按1)操作。
最后,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)(指示菌殺滅率≥99.9%判定為消毒合格),記錄驗(yàn)證結(jié)果。
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